奥林巴斯显微镜物镜常见问题解答(2)

校正环是某些高性能物镜上的一个可调节环，用于补偿盖玻片厚度偏差或浸入介质的差异。大多数物镜设计为适配标准0.17毫米盖玻片（1.5号盖玻片）。如果您的盖玻片不是这种厚度，或者您在折射率不同的其他液体中成像，就会产生球面像差和模糊。

而带有校正环的物镜可以通过调整镜头来适应这些变化—校正环通过机械方式移动内部镜片组来重新优化聚焦。通过调整校正环匹配到适宜的盖玻片厚度，可以防止由于盖玻片厚度不适合造成的图像模糊和像差。在实际操作中，只需转动校正环，直到图像（尤其在焦深较大区域）变得清晰为止。当盖玻片或样品厚度偏离标准0.17毫米标准值时，例如在底部较厚的活细胞室中，请使用校正环，以确保最佳成像质量。

高倍物镜的校准以盖玻片厚度为0.17毫米（1.5号盖玻片典型厚度）为宜。如果在物镜和样品之间使用明显较厚或较薄的玻璃，将导致光线无法按设计路径汇聚，从而引发球面像差乃至色差问题。这会导致图像模糊或失真。许多先进的物镜都有一个校正环来补偿这些像差。对于没有校正环的物镜，使用推荐的盖玻片厚度至关重要。使用标准的0.17毫米盖玻片有助于确保物镜的光学设计达到可靠性能，从而在全视场范围内产生清晰的图像和精准聚焦。

不保证兼容性，特别是对于现代无穷远校正系统。显微镜物镜通常使用通用螺纹（例如，许多奥林巴斯物镜都使用RMS螺纹），因此您可以将奥林巴斯物镜拧到其他品牌的物镜转盘上。但是，光学设计可能会有所不同：无限远校正物镜必须使用适当的镜筒透镜焦距和校正。例如，奥林巴斯的无限远物镜设计为适配180毫米的镜筒透镜，而另一个品牌可能使用200毫米的镜筒透镜；不同品牌之间混用会改变有效放大倍率并导致像差。此外，并非所有制造商的高端物镜都使用相同的螺纹间距或齐焦距离。总之，Evident或奥林巴斯物镜应在Evident/奥林巴斯显微镜（或为其专门设计的显微镜）上使用，以达到指定的性能。在调换不同制造商的物镜之前，请务必检查螺纹类型、镜筒长度和光学兼容性。

共焦显微镜要求高分辨率和高效聚光，因此首要考虑因素是高NA和出色的光学校正。选择高NA物镜（如60X/1.40油或60X/1.20水）能尽可能收集更多荧光信号和细节。使用共焦和其他高倍率技术时，在可能的情况下选择NA值最高的物镜，可获得更高的分辨率。共焦技术首选平面复消色差物镜，因为这种物镜具有出色的色度校正能力（在对多个荧光通道成像时非常重要）和相对较平的视场。例如，我们的奥林巴斯X Line系列物镜集成了NA提升、平整度提高和400-1000 nm宽谱段色差校正技术，特别适合用于多色共焦成像。同时要考虑工作距离和浸润介质。对于较厚的样本或活细胞，使用水或硅胶浸透透镜可减少折射率失配。对于载玻片上的固定样本，油浸透镜可提供更高的NA值和分辨率。

DIC利用偏振光和诺马斯基/沃拉斯顿棱镜来产生对比度因此，用于DIC的物镜应基本无应变（即玻璃内部无双折射），以免干扰偏振光。与相衬物镜不同，DIC物镜通常没有内置的环状结构或特殊改装，主要要求是光学质量高，玻璃应变小。我们的平场物镜（如奥林巴斯UPlan或MPLN系列）设计为兼容DIC技术。许多物镜都贴有用于DIC的标签，或者只是因为内部应力极小而表现良好。过去，市面上销售的用于偏振光显微镜的物镜都标有“POL”或无应变，但许多现代奥林巴斯复消色差物镜和萤石物镜已具有足够低的应变，可用于DIC。因此，您不需要专门购买DIC物镜，而是可以使用已知可与DIC兼容的高质量平场消色差/萤石/复消色差物镜（但请务必使用与您物镜放大倍率匹配的正确DIC棱镜滑块组）。

活细胞成像通常要用到专门的浸入式物镜，特别是水或硅胶浸入式透镜。这些物镜使用的浸入介质折射率更接近活细胞的折射率（水~1.33或硅油~1.40），在对含水试样成像时可最大限度地减少球面像差。

我们的硅胶浸入式物镜非常适合观察活细胞。硅胶浸入式物镜（如奥林巴斯UPLSAPO 60XS硅胶）具有高NA（约1.30）和相对较长的工作距离（约0.3毫米），可对厚标本成像。硅油的主要优点是在37 °C的温度下不会蒸发或变干，因此长期延时成像比浸水成像更稳定，维护成本更低。水浸物镜（NA~1.1-1.2）也可用于活细胞，尤其是短时间成像，因为它们与细胞介质天然匹配。然而，水会随着时间的推移而蒸发或导致焦距漂移。

对于长时间的活细胞实验，硅胶浸入式物镜通常是首选，它能在原生生物环境中提供高分辨率和高亮度，同时避免了干燥问题和球面像差。通常情况下，请务必确认您选择的物镜可与显微镜兼容，并且有适合长期使用的合适浸油或水介质输送系统。