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明场显微镜对于许多透明生物标本通常只能提供低对比度图像，无法区分很多细节。 提高明场显微镜对比度的一种方法是使用选择性染色剂，但这种染色剂通常对活细胞有毒。 使用相差光学显微镜，无需染色就可以更大对比度观察各种类型生物标本的结构。 相差方法利用样本结构之间的光密度差异，使光与样本及其结构相互作用后发生相位变化。
徕卡显微镜为各种生命科学和法医学应用中的细胞或组织研究提供相差方法。 相差方法在某些材料科学和地球科学应用中也非常有用。
相差是一种光学对比度技术，用在显微镜上可以使生物样本细胞中未染色的结构显示出来。 细胞结构在明场照明下显得透明，使用相差方法后能够具有高对比度和丰富的细节。 细胞中不同结构之间的光密度不同，光与这些结构相互作用后相位就会发生变化。 这个现象就是相差方法的基础。 光密度高的细胞结构看起来就会比光密度低的结构更暗。
相差显微镜大多数时候用于观察生物标本和组织。 从固定标本到活细胞和活组织，各种各样的生物标本都可以通过相差显微镜观察。 请阅读这些文章中举的例子：https://www.leica-microsystems.com/science-lab/phase-contrast 和
https://www.leica-microsystems.com/science-lab/optical-contrast-methods
相差显微镜类似于传统的宽场显微镜，不同之处在于它使用环形光圈和四分之一波片（λ/4）相位板。 环形光圈位于光源和聚光镜之间，相位板位于物镜后面的显微镜光学器件中。 环形光穿过光圈，被聚光镜聚焦到待观察的生物标本上。
部分环形光被样本的光密结构衍射，发生约λ/4的负相位差。 发生相位差的衍射光绕过四分之一波片。 与此不同，另一部分环形光直接穿过样本，不发生偏离，到达相位板后发生λ/4正相位差。 被样本结构衍射的光与穿过相位板的光之间的总相位差约为λ/2，因此会发生相消干涉。 因此，光密度高的细胞结构看起来就会比光密度低的结构更暗。
更多信息请参考以下文章：https://www.leica-microsystems.com/science-lab/phase-contrast
徕卡显微系统的LED照明为各种入射光应用提供了冷调、自然的色光。与传统的卤素灯相比，LED技术耗电更低，持续时间更长，从而节省了能源和金钱。如果你正在寻找均匀、高对比度、同轴、高度分散，或几乎无阴影的照明系统，徕卡为您的应用和任务提供广谱LED照明灯。
LED技术提供了一个很好的显微镜的巨大利益，也有许多优点。
耐久度（25,000至50,000小时，视机型而定）
自然色温
低功耗（比卤素灯）
照明灯可以有一个非常紧凑的设计
一般操作无风扇（无噪音）
恒定色温，甚至当调光
“冷光源”
Leica LED5000 系列：对于高性能显微镜
Leica LED3000系列: 对于常规的体视显微镜
Leica LED2000/2500 系列: 代表与集成的LED照明进行例行体视显微镜
Leica LED1000 系列: 模块化的LED进行例行体视显微镜照明系列
Leica KL300 LED 系列:与大范围的光纤光导例行体视显微镜冷光源
环形灯照明最适合于明亮，均匀的照明。
Leica LED3000 RL, Leica LED5000 RL
高对比度照明提供高灵活性，可移动的鹅颈聚光灯照明。固定多对比照明提供了相同的结果，但他们的设计使得重复性的照明设置。
聚光灯照明: Leica LED3000 SLI, Leica LED5000 SLI
多对比照明: Leica LED3000 MCI, Leica LED5000 MCI
同轴照明，光束通过光学系统的指导和对样本中反映出来。这要求样品是光滑的反光。同轴照明可以用常规以及高性能的立体显微镜。
Leica LED5000 CXI
闪亮的样品往往是非常困难记录为文件。下或曝光过度区域收购数码显微镜摄像头，并不能得到进一步的评估。为了改善这个问题，一个特殊的圆顶照明开发与徕卡FlexDome™。
Leica LED5000 HDI
影无照明使用被称为“近垂直照明。”在这里，有两个 LED射灯是非常接近的光轴和样品上大放异彩。
Leica LED3000 NV
盖玻片是显微镜制样中常用的耗材，但是盖玻片是有厚度的，它会对光线穿行造成一定的改变，从而影响成像的清晰度和亮度。由于绝大部分的物镜是针对0.17mm（或者称为#1.5）盖玻片进行设计生产的，因此常规制样过程中，显微镜厂商一般推荐使用厚度为0.17mm的盖玻片以达到最佳的成像效果。
但是市面上的盖玻片耗材多种多样，厚薄不一（见表1）。除此之外，在倒置显微镜上，经常会使用诸如培养皿、多孔板等各种不同类型的耗材，有些器皿的底部厚度甚至达到了1-2mm。此时，必须使用带有校正环功能的物镜来进行成像。
表1、MatTek公司不同号码盖玻片及其对应的实际厚度
在倒置显微镜中，经常需要配置长工作距离物镜，因为长工作距离物镜不仅能用于载玻片观察，还能兼容不同底部厚度的器皿，进行活细胞观察。在长工作距离物镜上，我们经常会发现有一圈能左右转动的校正环（图1）。针对不同厚度的耗材，我们需要将校正环调节到不同位置。
图1、带校正环的20倍和63倍物镜。英文简写CORR代表此物镜带有校环，校正环可以左右转动，将环上的小点位置调节至当前使用盖玻片或器皿底部的厚度处。
别小看了这个校正环，它对显微成像会产生很大的影响。我们使用0.17mm盖玻片的样品进行了相应测试。明场成像时，如果校正环调节位置不对，成像清晰度会严重下降，而且是无法通过镜体调焦旋钮来改善的（图2）。在对荧光成像时，校正环设置不准确，除了清晰度下降以外，荧光的亮度也会发生大幅下降（图3）。因此，大家在倒置显微镜上观察时，记得要确认一下物镜是否带有校正环，校正环的位置调节是否正确。
图2、肾脏病理切片的明场成像。成像物镜为带校正环的40倍物镜，校正环位置分别为0（左上），0.17（右上），1.0（左下），2.0mm（右下）。
图3、Mito-TrackerRed标记的线粒体荧光成像。成像物镜为带校正环的63倍物镜，校正环位置分别为0.3（上），0. 7（中），0.17 mm（下）。
但是，倒置显微镜在物镜转盘处的操作空间狭小，对于手指粗壮的男同胞来说，伸手进去调节校正环稍显麻烦。特别是在搭载了双荧光光路和孵育箱的活细胞工作站上（图4），手动调节校正环会变得更加吃力。
图4、搭载双荧光光路的DMi8活细胞工作站（上图配置的为培养小室，下图配置的为大型孵育箱）
一直以来，徕卡将人性化设计贯穿于所有产品之中。针对倒置显微镜物镜转盘处操作空间狭小，手动调节校正环困难的问题，徕卡推出了独家设计的motCORR物镜，可通过外部旋钮和LAS X成像软件，即可对物镜校正环进行全电动调节（图5）。
图5、徕卡motCORR物镜（左），可通过外部旋钮（右下）和LAS X成像软件（右上）进行物镜校正环全电动调节。
尤其是在一些高端成像方式中，经常需要对物镜的校正环进行调节（图6）。motCORR能提供比手动调节更可靠的参数设置，而且更具有可重复性。
图6、徕卡motCORR物镜非常适用的三大应用方向：FCS（左）、多光子（中）和活细胞（右）成像。
如在FCS（Fluorescence Correlation Spectroscopy，荧光相关光谱）成像时，通过motCORR可轻松将共聚焦激发体积调节接近至数学模型，从而得出更加准确的FCS分析结果。其次，在做活体厚组织红外多光子成像时，由于组织内部的折射率不均一，会导致结构扭曲，荧光亮度大幅下降，通过motCORR对样品折射率的校正，以获得亮度和对比度更高的组织深部荧光图像，达到更大的穿透深度。此外，motCORR可与高数值孔径的水镜、水镜自动加水微泵和AFC（adaptivefocus control）自适应稳焦系统全面兼容，轻松实现完美活细胞成像。
来源：徕卡显微系统
使用LIBS通过目视和化学分析进行有效颗粒识别
在制药行业，从初始研发到最终产品的包装都可能出现颗粒污染。
理解颗粒成分并判断其对安全性和质量的潜在影响非常重要。对于污染源的识别，常用的化学颗粒分析方法较为复杂且耗时。
激光诱导击穿光谱（LIBS）能够同时进行目视和化学分析。DM6 M LIBS二合一解决方案可以快速识别颗粒。
在同一系统中进行操作
在1个工作流程步骤内发生
无需额外样本制备
无需将样本转移至其他分析器械
塑料、玻璃和金属颗粒可以通过其目视外观和光谱指纹进行区分。LIBS甚至可以进一步区分不同类型的金属和玻璃，并且可以大致识别有机材料。
来源：徕卡显微系统微信公众号
汽车工业现在会通过一系列装饰或功能性处理改善车身表面。然而，用于检测多层样本的传统质控方法不仅耗时，而且还会漏检缺陷。结定位表面研磨系统和光学显微镜的新方法有望提高检测的速度和可靠性。
安美特西班牙实验室经理F. Javier Ruiz Balbas讲述了自己使用这一系统的体验。安美特是一家全球领先的供应商，专为印刷电路板、先进包装和半导体制造以及装饰性和功能性表面处理提供特种化学药品、设备、服务和解决方案。
您能简单介绍下质控部门的工作流程吗？
Ruiz Balbas：安美特西班牙质控部门的工作流程主要是接收存在已知缺陷的部件。我们首先要通过金相制样对缺陷进行序列分析，例如切割和抛光环节，然后再执行后续的检测工作。样本制备好后，我们会使用光学显微镜和扫描电子显微镜执行检测。我们的工作主要是金相检验和测量，多围绕沉淀金属中产生的表面缺陷，例如铜、镍、铬、锌、金等。
您工作中的主要挑战是什么？
Ruiz Balbas：最大的挑战是如何在最短的时间内获得尽可能多的缺陷信息。
图：黄铜镍/镍/铬镀层顶部的半光亮镍、光亮镍和铬镀层。样本使用徕卡EMTXP制备。照片：安美特西班牙
图：ABS塑料上的铜涂层上的半光亮镍和光亮镍涂层。照片：安美特西班牙
随着新材料的发展，汽车工业中对质控的要求有哪些变化？
Ruiz Balbas：可持续性已经成为汽车工业各环节都必须满足的一项要求。也就是说，我们不仅要确保产品中不含致癌、致突变或生殖毒性物质（CMR），优化物理化学属性，还要减少碳排放。为此，十多年来，安美特一直坚持将我们年收入额的10%投入研发和材料科学领域。因此，我们也一直是汽车工业的首选表面处理合作伙伴。
您公司的质控部门有哪些独特的优势呢？
Ruiz Balbas：我们的优势主要在于我们在金相技术领域拥有丰富经验。
在使用徕卡EM TXP/DM2700 M系统之前，工作流程是怎样的？有哪些不足之处？
Ruiz Balbas：传统的样本制备方法很难发现细微的缺陷和问题。在很多情况下，人工操作因素，例如移动或样本制备，都会导致饰面发生变化；或者在某些情况下，磨削-抛光过程还会导致样本倾斜。移动样本的过程中，还需要很多的辅助性支持材料，例如使用树脂包覆样本。
使用徕卡EM TXP表面定位研磨制备系统，在材料切割和抛光过程中，我们可以通过可控的步骤序列实现渐进式操作。我们可以针对目标细节指定想要增加的微米数量。可控的切割-抛光递增量可以从0.5微米到100微米的范围内自由选择。在此之前，我们根本无法可视化表面外观或缺陷轮廓上确切的横截面。
现在使用徕卡EM TXP/DM2700 M后，从横截面开始到制备再到完成，利用一体式立体显微镜，我们可以从不同角度观察样本，实现表面外观和横截面的可视化。
您在日常工作中已经积累了一些操作徕卡EM TXP/DM2700 M的经验，那么您对它有什么概括性的总结呢？系统的哪些优势对您的质控工作帮助最大？
Ruiz Balbas：它操作起来灵活、自由，可以在短时间内获得高质量结果。它能确保样本制备方法的一致性和可重复性，进而保证样本分析准确无误。
END
相关产品
Leica DM2700 M正置金相显微镜
关于徕卡显微系统
徕卡显微系统的历史最早可追溯到19世纪，作为德国著名的光学制造企业，徕卡显微成像系统拥有170余年显微镜生产历史，逐步发展成为显微成像系统行业的领先的厂商之一。徕卡显微成像系统一贯注重产品研发和最新技术应用，并保证产品质量一直走在显微镜制造行业的前列。
徕卡显微系统始终与科学界保持密切联系，不断推出为客户度身定制的显微解决方案。徕卡显微成像系统主要分为三个业务部门：生命科学与研究显微、工业显微与手术显微部门。徕卡在欧洲、亚洲与北美有 7 大产品研发中心与 6 大生产基地，在二十多个国家设有销售及服务分支机构，总部位于德国维兹拉(Wetzlar)。了解更多信息，请访问：www.leica-microsystems.com.cn
来源:徕卡显微系统https://mp.weixin.qq.com/s/O4b7hcVhermpLAeux5w-ag
老款LAS软件已于2022年3月底停止服务，同时为回馈中国广大徕卡显微系统工业显微镜用户，徕卡公司将LAS软件升级优惠活动延续至2022年12月31日。即刻将您现有的LAS软件升级到全新LAS X软件，全新的功能等您体验！LAS X软件是徕卡公司德国软件团队研发的多功能应用软件，在这个软件平台上不但能实现徕卡多型号特别是数码显微镜及摄像头的统一操控，利用各图像处理功能模块完成特殊的图像采集工作，还可以对图像进行处理及高级分析，在配合数码显微镜采集图像时，能够自动识别物镜的倍数，在所拍摄的图片里加入相应的标尺等自适应功能。LAS X划重点2020年之后购买的LAS用户，全部可以免费从LAS升级到LAS X（包含清洁度专家软件模块）对于2020年之前购买的LAS用户，我们也依然提供多种优惠福利：活动一将原有的LAS 软件升级成 最新版LAS X软件，优惠价仅需 $380活动二购买>7500$的新硬件或维修配件，可免费升级原有的LAS软件 （包含清洁度专家软件模块），同时享受徕卡Service工程师免费上门注意事项：部分优惠升级活动内容不包含工程师上门服务费 （具体请咨询当地销售）钢铁专家模块需另外核算；一个LAS License key编号只能用于一次优惠或免费升级；如果客户需更换电脑，请自行采购电脑。来源： 徕卡显微系统https://mp.weixin.qq.com/s/4xBoQCWA8i4rz7udhHkJmw
老款LAS软件已于2022年3月底停止服务，同时为回馈中国广大徕卡显微系统工业显微镜用户，徕卡公司将LAS软件升级优惠活动延续至2022年12月31日。即刻将您现有的LAS软件升级到全新LAS X软件，全新的功能等您体验！
LAS X软件是徕卡公司德国软件团队研发的多功能应用软件，在这个软件平台上不但能实现徕卡多型号特别是数码显微镜及摄像头的统一操控，利用各图像处理功能模块完成特殊的图像采集工作，还可以对图像进行处理及高级分析，在配合数码显微镜采集图像时，能够自动识别物镜的倍数，在所拍摄的图片里加入相应的标尺等自适应功能。
LAS X
划重点
2020年之后购买的LAS用户，全部可以免费从LAS升级到LAS X（包含清洁度专家软件模块）
对于2020年之前购买的LAS用户，我们也依然提供多种优惠福利：
活动一
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注意事项：
部分优惠升级活动内容不包含工程师上门服务费 （具体请咨询当地销售）
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如果客户需更换电脑，请自行采购电脑。
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使用现在已开发的各种荧光蛋白和多色探针几乎可以标记任何分子。 对囊泡、细胞器、细胞和组织中的蛋白质动力学成像的能力为了解细胞在健康和疾病状态下如何工作提供了新的洞察力。 这些包括有丝分裂、胚胎发育和细胞骨架变化等过程的时空动态。
研究活细胞时，常见的障碍包括光毒性和光损伤。 要捕捉快速的生物过程，关键是保持细胞健康并获得清晰的图像，确保数据可靠、无伪影。 活‐细胞显微成像通常需要在图像质量与细胞健康之间作出取舍。 在成像过程中必须保持特定的环境条件，以免细胞发生变化。
各种高性能的徕卡成像解决方案可以克服活细胞成像的这些挑战，有助发现细胞生理学和动力学方面的新信息。
成像过程中的细胞活性和动力学
徕卡显微系统为您提供活细胞成像方面的智能创新。 我们的解决方案可帮助您获得最佳的图像质量，同时保护好您的样本。
大多数细胞过程在三维空间中随着时间的推移进行。 因此，若要掌握全面的情况，必须以四个维度（XYZ 和时间）对细胞成像。 延时‐成像方法可捕捉从几秒到几个月内的细胞事件。 也可以在特定时间点对细胞重复成像。 为了在这个过程中保护细胞活性，活细胞成像时需要温度、酸碱度和湿度都受到控制。 曝光量也应在最低限度，以免发生光毒性。
徕卡显微系统提供的成像解决方案有助于优化您对活细胞的研究，即使是长时间的研究也同样如此。 它们能提供必要的图像对比度和分辨率，有助动态事件的分析。 一些徕卡成像系统还能实现高速成像，因此不会错过任何关键的细胞事件。
您的活细胞成像需求
要想成功地进行活细胞成像实验，使用合适的平台至关重要。 在选择用于活细胞成像的光学显微镜时，应考虑以下3个变量：检测器灵敏度（信噪比）、样本活性和图像采集速度。
适合活细胞应用的方法能够在不损伤细胞的情况下对动态事件成像，因为细胞损伤会影响结果。
活细胞成像主要使用荧光显微镜进行。 宽场显微镜可灵活激发和快速采集，通常用于对细胞动态和发育进行长时间成像。 共聚焦显微镜通常用于研究亚细胞动态事件。 多光子显微镜可使用较长波长的光激发，可减少光漂白并延长细胞活性。 最后，荧光寿命成像 (FLIM) 可用于研究细胞中的快速动态信号事件。
徕卡显微系统的 THUNDER 成像系统、STELLARIS 共聚焦平台和 FLIM 提供了最新的宽场和共聚焦成像创新技术，可快速进行 3D 活细胞成像。
关于活细胞成像
除了细胞或器官的结构组织，细胞动态过程是一个功能生物实体的主要贡献者。当然，这些过程可以在活细胞中通过非侵入性技术如光学方法观察到，统称为“活细胞成像”方法。活细胞成像涵盖了所有用显微镜观察活细胞的技术——从用体视显微镜观察胚胎发生，到用复合显微镜研究细胞生长，直到用荧光染料或荧光蛋白研究细胞的生理状态或细胞运输。尽管对实验人员和设备(如成像系统，温度、CO2浓度控制)都要求很高，但活细胞成像技术提供的结果是当今研究不可或缺的。
正确的清洁度分析解决方案对质量控制至关重要。本文介绍了选择适合自身需求的解决方案时应考虑的一些重要因素。这些因素取决于不同的方面，例如行业（微电子或汽车）、污染物类型、尺寸、成分、材料属性和可能造成的损害等。
从基本的清洁度验证到更复杂的分析，有多种基于显微镜和激光光谱的清洁度解决方案可供选择。
“
介 绍
汽车零部件和电子元件中的微粒子污染会对产品性能和使用寿命产生严重的影响[1-3]。如果关键部件受到重度污染，车辆或设备系统就会出现重大故障。因此，对于现代制造和生产中的质量保证，清洁度分析在确定颗粒物尺寸和材料属性方面具有重要的作用。为帮助用户选择适合自己需求的正确清洁度分析解决方案，下文列出了一些需要考虑的主要因素。
需要考虑的因素
为找到最适合用户需求的清洁度分析解决方案，可以先思考下面的几个问题。
主要应用是什么？
清洁度分析是否会影响组件和零部件的生产与组装，例如汽车和电子行业？如果是，那么这两个行业对颗粒物污染有着严格的要求，包括类型、大小、成分和可能造成的损害等，通常要按照ISO 16232、VDA 19或ZVEI（电子工程技术清洁度）等标准和指南执行分析[2,4]。或者清洁度分析是针对液压流体、润滑剂、燃油和医药产品？对大多数机械系统而言，需按照ISO 4406和DIN 51455标准来对液压流体、润滑剂和燃油执行清洁度分析[5]。医药产品清洁度分析通常遵循USP 788标准。由于不同应用的清洁度分析存在重大的差异，选择的解决方案需要能够准确可靠地确定颗粒物分析所要求的各项参数。
图1：示例A)汽车零部件和组件，和B)印刷电路板(PCB)，清洁度分析在质量控制和生产中可以发挥重要的作用。
要分析的颗粒物的尺寸是多大？
在汽车行业中，大颗粒物(>25 µm)和坚硬的颗粒物（陶瓷和金属）由于其磨损性质可能会造成严重的损害。但对于亚微米级的电子元件，即使是较小的颗粒物（5到10µm或更小）也会造成问题。对于流体清洁度，需要分析5µm或更大的颗粒物。选择清洁度分析解决方案时，了解要分析的颗粒物的尺寸非常重要。
图2：清洁度分析中的滤膜里污染物的图片，显示了不同尺寸的颗粒物。
应用需要区分反光颗粒物和非反光颗粒物吗？
反光颗粒物，即导电性颗粒物，通常为金属，相比非导电性颗粒物，通常为非金属，可对汽车零部件和电子元件造成更大的损害。因此，在确定颗粒物可能造成的潜在损害时，如果能够区分反光和非反光颗粒物，会大有帮助。如果清洁度分析解决方案能够帮助用户有效区分反光颗粒物和非反光颗粒物，用户便可以更好地确定颗粒物可能造成的损害。
确定颗粒物材料重要吗？
如果清洁度分析的最终目标是找到并清除污染物来源，则了解颗粒物的成分便十分有用。在这种情况下，理想的解决方案应能够帮助用户高效可靠地识别颗粒物材料。
图3：使用光学显微镜和激光光谱确定的铝合金颗粒物的成分。
来源：徕卡显微系统 https://mp.weixin.qq.com/s/iJ3mZ8KS3LLKLQ1Y315olg
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